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免疫磁珠如何分选?

    免疫磁珠细胞分选办法能够在几分钟内从杂乱的细胞混合物中别离出很高纯度的细胞。把细胞用超级顺磁性的 MACS MicroBeads (MACS微型磁珠)特异性地符号,磁性符号完后,把这些细胞经过一个放在强而稳定磁场中的分选柱。分选柱里的基质构成一个高梯度磁场。被磁性符号的细胞逗留在柱里而未被符号的细胞则流出。当分选柱移出磁场后,逗留柱内的磁性符号细胞就能够被洗脱出来,这样就彻底能够取得符号和未符号的两个细胞组份。  超顺磁性的MACS MicroBeads 的体积很小,其直径约为50nm,体积约小于真核细胞的一百万份之一,可与病毒的巨细相比。符号细胞上的微型磁珠即便在扫描电镜照片上也简直看不到。磁性抗体和磁性符号物间的反响可在几分钟内完结。  因为微型磁珠的体积极小,所以不会对细胞构成机械性压力,并且使孵育时间短,操作过程快。MicroBeads 构成一个稳定的胶体液,它们在磁场中既不沉淀又不凝集。微型磁珠的巨细和它的构成成份(氧化铁和多糖)使其可被生物降解,且不会激活细胞或影响细胞的功用和生机,细胞的生理功用也不变。磁珠不需要去掉,因而,阳性分选出的细胞(即磁性符号细胞)可立即用于分析和随后的试验。  用MACS 细胞分选体系能够别离出十分纯的细胞集体,并且有极好的回收率和存活率。根据细胞频率和符号表达水平的不一样,MACS别离细胞的纯度可达95%-99.9%,回收率>90%。  免疫磁珠法别离细胞原理:  免疫磁珠法别离细胞是根据细胞表面抗原能与衔接有磁珠的特异性单抗相联系,在外加磁场中,经过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而逗留在磁场中,无该种表面抗原的细胞因为不能与衔接着磁珠的特异性单抗联系而没有磁性,不在磁场中逗留,从而使细胞得以别离。  免疫磁珠法分为正选法和负选法:  正选法-磁珠联系的细胞即是所要别离取得的细胞  负选法-磁珠联系不需要的细胞,游离于上清液的细胞为所需细胞  一般来说,负选法比正选法的磁珠用量大  磁珠: 巨细在0.1-0.45mm 包被了出产的高质量单抗磁珠已为白细胞亚群的分选所优化 将包被了特异性单抗的BD IMag磁珠参加细胞悬液,磁珠特异性地与有相应抗原的细胞亚群联系,经过别离得到的连有磁珠的细胞可直接用于功用试验和用流式细胞仪检测。  磁别离细胞的重要目标是:  纯度和得率,这取决于磁珠所衔接单抗的特异性和磁珠巨细(磁性),但是太小的磁珠得率不高,太大的磁珠又会影响细胞活性,也无法直接上流式。


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